fa نتایج طراحی روش محیط آگار ویژه برای تعیین حساسیت دارویی سویه‌های مایکوباکتریوم توبرکولوزیس به پیرازینامید در انیستیتو کشوری تحقیقات سل و بیماری‌های ریوی تهران عمومى General پژوهشی Original <p><strong>مقدمه:</strong> پیرازینامید یکی از چهار داروی خط اول ضدسلی است که علاوه بر کوتاه کردن دوره درمان با از بین بردن اشکال فعال و غیرفعال باسیل سل در محیط اسیدی درون ماکروفاژها، در ریشه‌کن کردن ارگانیسم در بدن بیمار بسیار مؤثر است. <br>بر خلاف سایر داروهای ضدسلی فعال بودن پیرازینامید در pH اسیدی (در صورتی که pH مناسب برای رشد ارگانیسم 8/6 می‌باشد)، سنجش حساسیت باسیل سل به این دارو را با مشکل اساسی مواجه ساخته است. </p><p><strong>روش کار:</strong> با یک سیستم بافری مناسب و پایدار pH محیط آگار پایه 7H10 برابر با 6 تنظیم می‌گردد، از طرفی مواد مهارکننده رشد، از ترکیب محیط آگار پایه 7H10 حذف گردیده و محیط با مکمل‌های ویژه سرم حیوانی بسیار غنی می‌گردد به طوری که ارگانیسم در pH برابر با 6 همانند شرایط pH برابر با 8/6 تکثیر نماید. با استفاده از معادله هندرسن- هسل باخ که فعالیت آنزیم- سوبسترا را در pH های مختلف مشخص می‌کند با توجه به غلظت بحرانی مقدار لازم دارو در مقادیر متفاوت به محیط افزوده شده و بر اساس روش تناسب نتایج قرائت می‌گردد. به همراه سویه‌های مورد بررسی از سویه‌های حساس و مقاوم استاندارد نیز به عنوان کنترل استفاده می‌گردد. جهت کنترل بیشتر سویه‌های مورد بررسی و کنترل در محیط فاقد دارو نیز کشت می‌گردد. حساسیت سویه‌های مورد بررسی علاه بر پیرازینامید در برابر سایر داروی خط اول ضدسل یعنی ریفامپین، ایزونیازید، اتامبوتول و استرپتومایسین نیز مورد مطالعه قرار گرفته است که در بخش نتایج متن مقاله ارایه شده است. </p><p><strong>یافته‌ها:</strong> نتایج به دست آمده در طی مدت بررسی نشان می‌دهد که حدود 6 ٪ از سویه‌های باسیل سل جدا شده از بیماران به پیرازینامید مقاوم می‌باشد و تقریباً 1 ٪ جدا شده‌ها نیز فقط به پیرازینامید مقاوم است. با توجه به این که به طور مداوم عدم تأثیر pH پایین محیط کشت مورد استفاده بر رشد ارگانیسم کنترل می‌گردد و معادله هندرسن- هسل باخ نیز در تعیین فعالیت آنزیم بر سوسترا یسیار دقیق می‌باشد، نتایج به دست آمده قابل اطمینان می‌باشد. </p><p><strong>نتیجه‌گیری:</strong>  مزیت دیگر این روش این است که با توجه به غلظت‌های مختلف دارو می‌توان حساسیت و مقاومت واقعی را تعیین نمود، ضمناً می‌نوان به صورت مستقیم (همزمان به کشت اولیه نمونه) حساسیت و یا مقاومت به پیرازینامید را تعیین نمود. </p><p>  </p> <p><strong>Introduction: </strong>Pyrazinamide (PZA) is one of the four front- line antituberculosis agents, which is very effective in eradicating the organism from the body by killing the active and non-active types of Mycobacterium tuberculosis in the acidic pH within macrophages, as well as in shortening the treatment course. Unlike the other antituberculosis agents, PZA is active in acidic pH, while the favorable pH for growth of the organism is 6.8. This fact makes the susbptibility testing of the organism to PZA very difficult. </p><p><strong>Methods: </strong>With an appropriate and stable buffering system, pH of the 7H10 agar base medium was adjusted to be equal with 6. Moreover, the growth-inhibiting agents were omitted from the composition of the 7H10 agar base medium and it was highly enriched with special animal serum supplements, so that the organism could grow at a pH of 6 like the same way it would grow at the pH of 6.8. Using the Henderson-Hassle Bausch's equation, which determines the enzyme-substrate activity at different pH levels, individual critical concentrations of PZA were determined and added to the medium, and the results were traced using the proportional method. Standard PZA-susceptible and PZA-resistant strains were used as controls along with the specific strains under investigation. As additional control groups, the specific strains under study and the standard PZA-susceptible and PZA-resistant strains were also cultivated in PZA-free mediums. In addition to PZA-susceptibility testing, susceptibility of the specific strains under study to the other front-line antituberculosis agents was also assessed (rifampin, isoniazid, etambotul, and streptomycin). </p><p><strong>Results: </strong>Approximately 6 ٪ of the clinically isolated strains were identified as PZA-resistant and about 1 ٪ of the strains were resistant only to PZA. Since the low pH of the cultivation medium was continuously controlled in order not to interfere with growth of the organism, and the Henderson-Hassle Bausch's equation is very accurate in determination of the enzyme-substrate activity, our study results are reliable. </p><p><strong>Conclusion: </strong>An additional advantage of this method is feasibility of actual susceptibility or resistance determination based on different concentrations of the drug. It is also feasible to directly determine the susceptibility or resistance to PZA simultaneously with the primary sample culture. </p><p>  </p><p><strong>Hakim Research Journal 2008 11(1): 14- 21. </strong></p><p>  </p> مایکوباکتریوم، توبرکولوزیس، پیرازینامید، آگار 7H10 . Mycobacterium, tuberculosis, pyrazinamide, 7H10 agar. 14 21 http://hakim.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5-361&slc_lang=fa&sid=1 Najafimosleh M ,(PhD); دکتر محمد نجفی مصلح n_mosleh@yahoo.com Yes Ghazi-Saiedi K, (PhD); دکترکیومرث قاضی‌سعیدی No Farnia P, (PhD); دکتر پریسا فرنیا No Mohammadi F, (MD); دکتر فروزان محمدی No Velayati AA, (MD). دکترعلی‌اکبر ولایتی No