fa استفاده از آنتی‌بادی منوکلونال HS80 جهت شناسایی پروتئین آنتی‌ژنیک آن عمومى General پژوهشی Original <p><strong>مقدمه:</strong> از آنجایی‌که وقوع یک لقاح موفق نتیجه برهم کنش مناسب گیرنده‌ها و لیگاندهای مستقر در غشای دو سلول اسپرم و تخمک می‌باشد، بنابراین شناسایی وقایع مولکولی و گلیکوپروتئین‌های دخیل در این برهم کنش، با استفاده از آنتی‌بادی منوکلونال می‌تواند اطلاعات موجود در زمینه مکانیسم‌های دخیل در لقاح را افزایش داده و از طرف دیگر علت ناباروری‌های ناشی از نقایص مولکولی و یا ناباروری‌های با علت ایمونولوژیک را روشن ‌سازد. </p><p><strong>روش کار:</strong> بعد از تولید آنتی‌بادی‌های منوکلونال علیه آنتی‌ژن‌های سطحی اسپرماتوزوای انسانی، جهت تولید انبوه آنتی‌بادی با کشت سلول هیبریدوم در صفاق موش و ایجاد آسیت، مقادیر زیادی آنتی‌بادی تولید گردید. آنتی‌ژن‌های سطحی اسپرم‌های نرمال با استفاده از دو ترکیب NaCl و LIS ‌ به‌طور جداگانه استخراج شد. جهت تعیین محل آنتی‌ژن مورد نظر، آزمون ایمونوفلورسانس غیرمستقیم با استفاده از آنتی‌بادی HS80 صورت گرفت. در ضمن به‌منظور تعیین وزن مولکولی آنتی‌ژن مورد نظر، آزمون ایمونوبلاتینگ پروتئین‌های استخراجی انجام شد. </p><p><strong>یافته‌ها:</strong> بعد از تزریق سلول هیبریدوم HS80 به صفاق هر موش حدود mg 5/13 آنتی‌بادی ازمجموع پنج موش به‌دست آمد. به‌دنبال رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس در ناحیه آکروزومی و در قسمت کوچکی از ناحیه گردن، فلورسانس درخشانی بین تمام جمعیت سلول‌های اسپرمی مشخص گردید. در عین حال بعد از آزمون ایمونوبلاتینگ، وزنی در محدوده 4 ±80 کیلو دالتون برای آنتی‌ژن مورد نظر ( HS80 ) محاسبه شد. </p><p><strong>نتیجه‌گیری:</strong> حضور آنتی‌ژن مزبور در ناحیه تحت استوایی سر اسپرم، احتمال داشتن نقشی در فرایندهای حیاتی اسپرم از جمله اتصال به غشای سیتوپلاسمی تخمک را در مورد این آنتی‌ژن افزایش می‌دهد و امکان دارد اتصال این آنتی‌بادی به اسپرم بتواند در شرایط فیزیولوژیک بر روند لقاح تأثیر محسوسی داشته باشد که می‌تواند این امر موضوع تحقیقات بعدی قرار گیرد. </p><p>  </p> <p><strong>Introduction: </strong>Since interaction between sperm and ovum results in fertilization, determination of molecular events and glycoproteins involved in this interaction may clear the cause of infertilitiy due to molecular defects or immunologic reasons. Thus we studied the properties of mentioned antigens in views of antigenic site and determination of its molecular weight and cross reactivity with other antigens by antisperm monoclonal antibody (HS80). </p><p><strong>Methods</strong>: Surface sperm antigens were extracted by NaCl and Lithium diiodosalicylate (LIS) separately. At the next stage, the location of mentioned antigen was determined by indirect immunofluorescence using HS80 monoclonal antibody. Meanwhile, molecular weight of mentioned antigen was measured by immunoblotting. Finally, ELISA was used to study the cross reactivity of monoclonal antibody with human peripheral blood leukocytes, semen proteins and other mammalian sperms (from rat and mouse). </p><p><strong>Results: </strong>Sub-equatorial and collar regions of all sperms had shiny fluorescence after immunofluorescence staining. Likewise, molecular weight range of the antigen was 80±4. Meanwhile, there was not any cross-reactivity among the antibody and other antigens except a 80 kD human leukocyte surface antigen. </p><p><strong>Conclusion: </strong>The presence of the antigen with 80 kD on sub-equatorial region may increase the possibility of its role in vital processes of sperm such as sperm/oocyte membrane fusion and fertilization. Thus,it is recommended to study the role of this antigen in fertilization, in the presence and absence of HS80 monoclonal antibody, sperm interaction with zona pellucida and Oolema using sperm functional studies. </p><p>  </p><p><strong><i>Hakim Research Journal 2007 9(4): 65- 75. </i><i /></strong></p> آنتی‌بادی منوکلونال، آنتی‌ژن‌های سطحی اسپرم انسان. Monoclonal antibody, human surface spermatozoa antigens. 65 75 http://hakim.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5-35&slc_lang=fa&sid=1 Torkabadi E, (MSc) ابراهیم ترک‌آبادی No Akhoondi MM, (PhD) دکتر محمدمهدی آخوندی akhondi@avesina.ac.ir Yes Pakzad P, (PhD) دکتر پرویز پاکزاد No Mahmoodi SAR, (MSc) سید احمدرضا محمودی No Bayat A, (BS) علی‌احمد بیات No Sadeghi MR, (PhD) دکتر محمدرضا صادقی No Jeddi Tehrani M, (PhD). دکتر محمود جدی تهرانی No مهناز حیدری No